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                                                                                                                                                  时间: 2018-07-26 作者:医学考研网 点击:

                                                                                                                                                  西医考研考点定位标记每天学(第72天)

                                                                                                                                                  常用分子生物学技术的原理及其应用

                                                                                                                                                   

                                                                                                                                                  (1) 分子杂交和印迹技术

                                                                                                                                                  ①分子杂交:确定单链核酸碱基序列的技术,其基本原理是待测单链核酸与已知序列的单链核酸(叫做探针)通过碱基配对形成可检出的双螺旋片段。这种技术可在DNA 与DNA,RNA 与RNA,或DNA 与RNA 之间进行,形成DNA-DNA,RNA-RNA 或RNA-DNA 等不同类型的杂交分子。

                                                                                                                                                  ②印迹技术:印迹技术是指将待测核酸分子结合到一定固相支持物上的方法,包括DNA 印迹技术、RNA印迹技术和蛋白质印迹技术三大类。

                                                                                                                                                  (2)PCR 技术的原理与应用

                                                                                                                                                   

                                                                                                                                                   

                                                                                                                                                  ②几种重要的PCR 衍生技术

                                                                                                                                                  Ⅰ. 转录PCR 技术( RT-PCR):是将RNA 的逆转录反应和PCR 反应联合应用的一种技术。即首先以RNA 为模板,在逆转录酶的作用下合成cDNA ,再以cDNA 为模板通过PCR 反应来扩增目的基因。RT-PCR 是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的RNA 进行定性和半定量分析的最有效方法。

                                                                                                                                                  Ⅱ. 原位PCR 技术:是在甲醛溶液(福尔马林)固定、石蜡包埋的组织切片或细胞涂片上的单个细胞内进行的PCR 反应,然后用特异性探针进行原位杂交,即可检出待测DNA 或RNA 是否在该组织或细胞中存在。由于常规PCR 与RT-PCR 技术的产物不能在组织细胞中直接定位,因而不能与特定的组织细胞特征表型相联系,而原位杂交技术虽有良好的定位效果,但检测灵敏度不高。原位PCR 方法弥补了PCR 技术和原位杂交技术的不足,是将目的基因的扩增与定位相结合的一种最佳方法。

                                                                                                                                                  Ⅲ. 实时PCR 技术:常规PCR 反应中产物以指数形式增加,在比较不同来源样品的DNA 或cDNA 含量时,产物的堆积将影响对检测样品中原有模板含量差异的准确判断,因而只能作为半定量手段应用。实时PCR 技术通过动态监测反应中的产物量,消除了产物堆积对定量分析的干扰,亦称为定量RCR 或实时定量PCR。实时PCR 的基本原理是引入了荧光标记分子,并使荧光信号强度与PCR 产物量成正比,对每一反应时刻的荧光信号进行实时分析,即可计算出PCR 产物量。


                                                                                                                                                  (责任编辑:医学考研网)

                                                                                                                                                  考研动态

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